稳转细胞株构建：

稳转细胞株构建是通过基因整合技术获得稳定表达目标基因的细胞系，载体整合到染色体后，利用抗性药物筛选获得稳定表达的细胞株。慢病毒因可感染分裂/非分裂细胞、低免疫原性等特点成为常用工具。

实验步骤：

1. 载体构建和病毒包装：将目的基因或shRNA序列克隆至慢病毒载体，携带抗性标记（如puro、neo）和荧光标签（如GFP），然后包装成慢病毒。
2. 预实验确定MOI值：通过梯度实验摸索最适病毒用量，确保感染效率。
3. 细胞感染：将病毒与宿主细胞共培养，通常需24小时内换液以去除残留病毒。
4. 抗性筛选：感染48小时后加入筛选药物（如嘌呤霉素），持续筛选1-2周。

• 优势：感染效率高，适用于多种细胞类型；可实现长期稳定表达。
• 局限：需生物安全防护，病毒制备周期较长。

慢病毒稳转株优势：

1. 降低实验成本：避免频繁转染或病毒包装。
2. 提升基因干扰或过表达效果：实现长期、稳定的基因表达。
3. 感染效率高，适用于多种细胞类型。
4. 提升基因干扰或过表达效果，可实现长期稳定表达。
5. 支持诱导表达系统：适用于致死基因或时空表达研究。